রোগীর সিরামের উচ্চ-রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রিক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে উচ্চ নির্দিষ্টতার সাথে সৌম্য এবং ম্যালিগন্যান্ট পালমোনারি নোডুলগুলির পার্থক্যকারী মেটাবোলোমিক্স।

কম্পিউটেড টমোগ্রাফি (সিটি) দ্বারা চিহ্নিত পালমোনারি নোডুলসের ডিফারেনশিয়াল ডায়াগনোসিস ক্লিনিকাল অনুশীলনে একটি চ্যালেঞ্জ রয়ে গেছে।এখানে, আমরা স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ, সৌম্য ফুসফুসের নোডুলস এবং স্টেজ I ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা সহ 480 টি সিরাম নমুনার গ্লোবাল মেটাবোলোমকে চিহ্নিত করি।অ্যাডেনোকার্সিনোমাস অনন্য বিপাকীয় প্রোফাইলগুলি প্রদর্শন করে, যেখানে সৌম্য নোডুলস এবং সুস্থ ব্যক্তিদের বিপাকীয় প্রোফাইলগুলিতে উচ্চ মিল রয়েছে।আবিষ্কার গ্রুপে (n = 306), সৌম্য এবং ম্যালিগন্যান্ট নোডুলসের মধ্যে পার্থক্য করার জন্য 27 বিপাকের একটি সেট চিহ্নিত করা হয়েছিল।অভ্যন্তরীণ বৈধতা (n = 104) এবং বাহ্যিক বৈধতা (n = 111) গ্রুপে বৈষম্যমূলক মডেলের AUC ছিল যথাক্রমে 0.915 এবং 0.945।পাথওয়ে বিশ্লেষণ সৌম্য নোডুলস এবং স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের তুলনায় ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা সিরামে ট্রিপটোফান হ্রাসের সাথে যুক্ত গ্লাইকোলাইটিক মেটাবোলাইট বৃদ্ধি পেয়েছে এবং পরামর্শ দিয়েছে যে ট্রিপটোফ্যান গ্রহণ ফুসফুসের ক্যান্সার কোষগুলিতে গ্লাইকোলাইসিসকে উৎসাহিত করে।আমাদের অধ্যয়ন সিটি দ্বারা সনাক্ত করা পালমোনারি নোডুলসের ঝুঁকি মূল্যায়নে সিরাম মেটাবোলাইট বায়োমার্কারের মান হাইলাইট করে।
ক্যান্সার রোগীদের বেঁচে থাকার হার উন্নত করার জন্য প্রাথমিক রোগ নির্ণয় গুরুত্বপূর্ণ।ইউএস ন্যাশনাল লাং ক্যান্সার স্ক্রীনিং ট্রায়াল (NLST) এবং ইউরোপীয় নেলসন স্টাডির ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে লো-ডোজ কম্পিউটেড টমোগ্রাফি (LDCT) দিয়ে স্ক্রীনিং উচ্চ-ঝুঁকিপূর্ণ গ্রুপ 1,2,3-এ ফুসফুসের ক্যান্সারের মৃত্যুহার উল্লেখযোগ্যভাবে কমাতে পারে।ফুসফুসের ক্যান্সারের স্ক্রীনিং-এর জন্য এলডিসিটি-এর ব্যাপক ব্যবহারের পর থেকে, উপসর্গবিহীন পালমোনারি নোডুলসের আনুষঙ্গিক রেডিওগ্রাফিক অনুসন্ধানের ঘটনা 4 বৃদ্ধি অব্যাহত রয়েছে।পালমোনারি নোডুলগুলিকে ফোকাল অস্পষ্টতা হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় 3 সেমি ব্যাস 5 পর্যন্ত।আমরা ম্যালিগন্যান্সির সম্ভাবনা মূল্যায়ন করতে এবং এলডিসিটিতে ঘটনাক্রমে সনাক্ত করা পালমোনারি নোডুলগুলির বিপুল সংখ্যক মোকাবেলা করতে অসুবিধার সম্মুখীন হই।CT এর সীমাবদ্ধতা ঘন ঘন ফলো-আপ পরীক্ষা এবং মিথ্যা-ইতিবাচক ফলাফলের দিকে নিয়ে যেতে পারে, যার ফলে অপ্রয়োজনীয় হস্তক্ষেপ এবং অতিরিক্ত চিকিত্সা6।অতএব, প্রাথমিক পর্যায়ে ফুসফুসের ক্যান্সার সঠিকভাবে সনাক্ত করতে এবং প্রাথমিক সনাক্তকরণ 7-এ বেশিরভাগ সৌম্য নোডুলগুলিকে আলাদা করার জন্য নির্ভরযোগ্য এবং দরকারী বায়োমার্কারগুলি বিকাশের প্রয়োজন।
রক্তের ব্যাপক আণবিক বিশ্লেষণ (সিরাম, প্লাজমা, পেরিফেরাল ব্লাড মনোনিউক্লিয়ার কোষ), জিনোমিক্স, প্রোটিওমিক্স বা ডিএনএ মিথিলেশন8,9,10 সহ, ফুসফুসের ক্যান্সারের জন্য ডায়াগনস্টিক বায়োমার্কার আবিষ্কারে আগ্রহ বৃদ্ধি করেছে।এদিকে, মেটাবোলোমিক্স পদ্ধতিগুলি সেলুলার শেষ পণ্যগুলিকে পরিমাপ করে যা অন্তঃসত্ত্বা এবং বহির্মুখী ক্রিয়া দ্বারা প্রভাবিত হয় এবং তাই রোগের সূত্রপাত এবং ফলাফলের পূর্বাভাস দিতে প্রয়োগ করা হয়।লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এলসি-এমএস) উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং বৃহৎ গতিশীল পরিসরের কারণে বিপাকবিদ্যা অধ্যয়নের জন্য একটি বহুল ব্যবহৃত পদ্ধতি, যা বিভিন্ন ভৌত রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য সহ বিপাককে আবৃত করতে পারে 11,12,13।যদিও প্লাজমা/সিরামের বৈশ্বিক বিপাকীয় বিশ্লেষণ ফুসফুসের ক্যান্সার নির্ণয়ের সাথে যুক্ত বায়োমার্কার সনাক্ত করতে ব্যবহার করা হয়েছে 14,15,16,17 এবং চিকিত্সার কার্যকারিতা, 18টি সিরাম বিপাকীয় শ্রেণীবিভাগ সৌম্য এবং ম্যালিগন্যান্ট ফুসফুসের নোডুলগুলির মধ্যে পার্থক্য করার জন্য অনেক বেশি অধ্যয়ন করা বাকি রয়েছে।- ব্যাপক গবেষণা।
অ্যাডেনোকার্সিনোমা এবং স্কোয়ামাস সেল কার্সিনোমা হল দুটি প্রধান উপপ্রকার নন-স্মল সেল ফুসফুস ক্যান্সার (NSCLC)।বিভিন্ন সিটি স্ক্রীনিং পরীক্ষা ইঙ্গিত দেয় যে অ্যাডেনোকার্সিনোমা হল ফুসফুসের ক্যান্সারের সবচেয়ে সাধারণ হিস্টোলজিকাল প্রকার 1,19,20,21।এই গবেষণায়, আমরা স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ, সৌম্য পালমোনারি নোডুলস এবং সিটি-সনাক্ত ≤3 সেমি সহ মোট 695টি সিরাম নমুনার মেটাবোলোমিক্স বিশ্লেষণ করতে আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-হাই-রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLC-HRMS) ব্যবহার করেছি।পর্যায় I ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমার জন্য স্ক্রীনিং।আমরা সিরাম মেটাবোলাইটের একটি প্যানেল চিহ্নিত করেছি যা ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাকে সৌম্য নোডুলস এবং স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ থেকে আলাদা করে।পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে অস্বাভাবিক ট্রিপটোফান এবং গ্লুকোজ বিপাক ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাতে সৌম্য নোডুলস এবং স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের তুলনায় সাধারণ পরিবর্তন।অবশেষে, আমরা এলডিসিটি দ্বারা সনাক্ত করা ম্যালিগন্যান্ট এবং সৌম্য পালমোনারি নোডুলগুলির মধ্যে পার্থক্য করার জন্য উচ্চ নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতার সাথে একটি সিরাম বিপাকীয় শ্রেণীবিভাগ স্থাপন এবং যাচাই করেছি, যা প্রাথমিক পার্থক্য নির্ণয় এবং ঝুঁকি মূল্যায়নে সহায়তা করতে পারে।
বর্তমান গবেষণায়, লিঙ্গ- এবং বয়সের সাথে মিলে যাওয়া সিরামের নমুনাগুলি 174 টি সুস্থ নিয়ন্ত্রণ থেকে, 292 জন সৌম্য পালমোনারি নোডুলস রোগী এবং 229 জন স্টেজ ফুসফুস অ্যাডেনোকার্সিনোমা রোগীর কাছ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল।695 টি বিষয়ের জনসংখ্যার বৈশিষ্ট্যগুলি পরিপূরক সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে।
চিত্র 1a তে দেখানো হয়েছে, সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টারে 174টি স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ (HC), 170 সৌম্য নোডুলস (BN), এবং 136টি স্টেজ I ফুসফুস অ্যাডেনোকার্সিনোমা (LA) নমুনা সহ মোট 480 টি সিরাম নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল।আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-হাই-রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLC-HRMS) ব্যবহার করে লক্ষ্যহীন বিপাকীয় প্রোফাইলিংয়ের জন্য ডিসকভারি কোহর্ট।পরিপূরক চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে, LA এবং HC, LA এবং BN-এর মধ্যে ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইটগুলিকে একটি শ্রেণিবিন্যাস মডেল প্রতিষ্ঠা করতে এবং আরও ডিফারেনশিয়াল পাথওয়ে বিশ্লেষণ অন্বেষণ করার জন্য চিহ্নিত করা হয়েছিল।সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টার দ্বারা সংগৃহীত 104টি নমুনা এবং অন্য দুটি হাসপাতাল দ্বারা সংগৃহীত 111টি নমুনা যথাক্রমে অভ্যন্তরীণ এবং বাহ্যিক বৈধতার শিকার হয়েছিল।
আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-হাই-রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLC-HRMS) ব্যবহার করে গ্লোবাল সিরাম মেটাবোলোমিক্স বিশ্লেষণের মধ্য দিয়ে আবিষ্কারের দলটির একটি অধ্যয়ন জনসংখ্যা।b সুস্থ নিয়ন্ত্রণ (HC, n = 174), সৌম্য নোডুলস (BN, n = 170), এবং স্টেজ I ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা সহ অধ্যয়ন দল থেকে 480টি সিরাম নমুনার মোট মেটাবোলোমের আংশিক সর্বনিম্ন বর্গক্ষেত্রের বৈষম্যমূলক বিশ্লেষণ (PLS-DA) (লস এঞ্জেলেস, n = 136)।+ইএসআই, ইতিবাচক ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন মোড, -ইএসআই, নেতিবাচক ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন মোড।দুটি প্রদত্ত গোষ্ঠীতে উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন প্রাচুর্য সহ c–e মেটাবোলাইটগুলি (টু-টেইল্ড উইলকক্সন স্বাক্ষরিত র‌্যাঙ্ক পরীক্ষা, মিথ্যা আবিষ্কারের হার সামঞ্জস্যপূর্ণ p মান, FDR <0.05) লাল (ভাঁজ পরিবর্তন > 1.2) এবং নীল (ভাঁজ পরিবর্তন <0.83) দেখানো হয়েছে। .) আগ্নেয়গিরির গ্রাফিকে দেখানো হয়েছে।f হায়ারার্কিক্যাল ক্লাস্টারিং হিট ম্যাপ LA এবং BN-এর মধ্যে টীকাযুক্ত বিপাকের সংখ্যার মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখাচ্ছে।উৎস তথ্য উৎস তথ্য ফাইল আকারে প্রদান করা হয়.
আবিষ্কার গ্রুপে 174 HC, 170 BN এবং 136 LA এর মোট সিরাম মেটাবোলোম ইউপিএলসি-এইচআরএমএস বিশ্লেষণ ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।আমরা প্রথমে দেখাই যে মান নিয়ন্ত্রণ (QC) নমুনাগুলি একটি তত্ত্বাবধানহীন প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ (PCA) মডেলের কেন্দ্রে শক্তভাবে ক্লাস্টার করে, যা বর্তমান অধ্যয়নের কার্যকারিতার স্থায়িত্ব নিশ্চিত করে (পরিপূরক চিত্র 2)।
চিত্র 1 বি-তে আংশিক সর্বনিম্ন বর্গ-বৈষম্যমূলক বিশ্লেষণে (PLS-DA) দেখানো হয়েছে, আমরা দেখতে পেলাম যে ইতিবাচক (+ESI) এবং নেতিবাচক (−ESI) ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নকরণ মোডে LA এবং BN, LA এবং HC-এর মধ্যে স্পষ্ট পার্থক্য ছিল। .ভিন্ন.যাইহোক, +ESI এবং -ESI অবস্থার মধ্যে BN এবং HC এর মধ্যে কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া যায়নি।
আমরা LA এবং HC-এর মধ্যে 382 ডিফারেনশিয়াল ফিচার, LA এবং BN-এর মধ্যে 231 ডিফারেনশিয়াল ফিচার এবং BN এবং HC-এর মধ্যে 95 ডিফারেনশিয়াল ফিচার পেয়েছি (উইলকক্সন সাইনড র্যাঙ্ক টেস্ট, FDR <0.05 এবং একাধিক পরিবর্তন>1.2 বা <0.83) (চিত্র .1c-e) ).একটি ডাটাবেসের (mzCloud/HMDB/Chemspider লাইব্রেরি) বিরুদ্ধে পিকগুলিকে আরও টীকা করা হয়েছিল (mzCloud/HMDB/Chemspider লাইব্রেরি) m/z মান, ধরে রাখার সময় এবং ফ্র্যাগমেন্টেশন ভর স্পেকট্রাম অনুসন্ধান (বিস্তারিত পদ্ধতি বিভাগে বর্ণিত) 22।অবশেষে, প্রচুর পরিমাণে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য সহ 33 এবং 38 টি টীকাযুক্ত বিপাকগুলি যথাক্রমে LA বনাম BN (চিত্র 1f এবং পরিপূরক সারণী 2) এবং LA বনাম HC (পরিপূরক চিত্র 3 এবং পরিপূরক সারণী 2) এর জন্য চিহ্নিত করা হয়েছিল।বিপরীতে, PLS-DA-তে BN এবং HC-এর মধ্যে ওভারল্যাপের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, BN এবং HC (পরিপূরক সারণী 2) তে প্রাচুর্যের উল্লেখযোগ্য পার্থক্য সহ শুধুমাত্র 3টি বিপাক সনাক্ত করা হয়েছিল।এই ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইটগুলি বিস্তৃত জৈব রাসায়নিক পদার্থকে কভার করে (পরিপূরক চিত্র 4)।একসাথে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি সিরাম মেটাবোলোমে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তনগুলি প্রদর্শন করে যা সৌম্য ফুসফুসের নোডুলস বা স্বাস্থ্যকর বিষয়গুলির তুলনায় প্রাথমিক পর্যায়ের ফুসফুসের ক্যান্সারের মারাত্মক রূপান্তরকে প্রতিফলিত করে।এদিকে, BN এবং HC-এর সিরাম মেটাবোলোমের সাদৃশ্য নির্দেশ করে যে সৌম্য পালমোনারি নোডুলগুলি সুস্থ ব্যক্তিদের সাথে অনেক জৈবিক বৈশিষ্ট্য ভাগ করে নিতে পারে।প্রদত্ত যে এপিডার্মাল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর (EGFR) জিন মিউটেশনগুলি ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা সাবটাইপ 23-এ সাধারণ, আমরা সিরাম মেটাবোলোমে ড্রাইভার মিউটেশনের প্রভাব নির্ধারণ করার চেষ্টা করেছি।তারপরে আমরা ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা গ্রুপে ইজিএফআর স্ট্যাটাস সহ 72 টি ক্ষেত্রে সামগ্রিক বিপাকীয় প্রোফাইল বিশ্লেষণ করেছি।মজার বিষয় হল, আমরা পিসিএ বিশ্লেষণে (পরিপূরক চিত্র 5a) EGFR মিউট্যান্ট রোগীদের (n = 41) এবং EGFR ওয়াইল্ড-টাইপ রোগীদের (n = 31) মধ্যে তুলনামূলক প্রোফাইল খুঁজে পেয়েছি।যাইহোক, আমরা 7 টি বিপাক শনাক্ত করেছি যার প্রাচুর্য EGFR মিউটেশনের রোগীদের মধ্যে বন্য-টাইপ EGFR (t পরীক্ষা, p <0.05 এবং ভাঁজ পরিবর্তন > 1.2 বা <0.83) (পরিপূরক চিত্র 5b) রোগীদের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছিল।এই বিপাকগুলির বেশিরভাগই (7টির মধ্যে 5টি) অ্যাসিলকার্নিটাইনস, যা ফ্যাটি অ্যাসিড জারণ পথে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।
চিত্র 2 এ দেখানো ওয়ার্কফ্লোতে যেমন দেখানো হয়েছে, নুডুল শ্রেণীবিভাগের জন্য বায়োমার্কারগুলি LA (n = 136) এবং BN (n = 170) তে চিহ্নিত 33টি ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইটের ভিত্তিতে ন্যূনতম পরম সংকোচন অপারেটর এবং নির্বাচন ব্যবহার করে প্রাপ্ত হয়েছিল।ভেরিয়েবলের সেরা সমন্বয় (LASSO) - বাইনারি লজিস্টিক রিগ্রেশন মডেল।মডেলের নির্ভরযোগ্যতা পরীক্ষা করতে দশ-গুণ ক্রস-ভ্যালিডেশন ব্যবহার করা হয়েছিল।পরিবর্তনশীল নির্বাচন এবং পরামিতি নিয়মিতকরণ প্যারামিটার λ24 এর সাথে একটি সম্ভাব্য সর্বোচ্চকরণ জরিমানা দ্বারা সমন্বয় করা হয়।বৈষম্যমূলক মডেলের শ্রেণীবিভাগ কর্মক্ষমতা পরীক্ষা করার জন্য অভ্যন্তরীণ বৈধতা (n = 104) এবং বাহ্যিক বৈধতা (n = 111) গোষ্ঠীতে বৈশ্বিক বিপাকবিদ্যা বিশ্লেষণ আরও স্বাধীনভাবে সম্পাদিত হয়েছিল।ফলস্বরূপ, আবিষ্কার সেটে 27টি বিপাককে সবচেয়ে বড় গড় AUC মান (চিত্র 2b) সহ সেরা বৈষম্যমূলক মডেল হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল, যার মধ্যে 9টি বিএন (চিত্র 2c) এর তুলনায় LA-তে কার্যকলাপ বৃদ্ধি করেছে এবং 18টি হ্রাস পেয়েছে।
দশ-গুণ ক্রস-ভ্যালিডেশনের মাধ্যমে বাইনারি লজিস্টিক রিগ্রেশন মডেল ব্যবহার করে আবিষ্কার সেটে সেরাম মেটাবোলাইটের সেরা প্যানেল নির্বাচন করা এবং অভ্যন্তরীণ ও বাহ্যিক বৈধতা সেটে ভবিষ্যদ্বাণীমূলক কর্মক্ষমতা মূল্যায়ন সহ একটি পালমোনারি নোডুল ক্লাসিফায়ার তৈরির জন্য ওয়ার্কফ্লো।বি বিপাকীয় বায়োমার্কার নির্বাচনের জন্য LASSO রিগ্রেশন মডেলের ক্রস-ভ্যালিডেশন পরিসংখ্যান।উপরে প্রদত্ত সংখ্যাগুলি একটি প্রদত্ত λ এ নির্বাচিত বায়োমার্কারের গড় সংখ্যা উপস্থাপন করে।লাল বিন্দুযুক্ত রেখা সংশ্লিষ্ট ল্যাম্বডায় গড় AUC মান উপস্থাপন করে।ধূসর ত্রুটি বার সর্বনিম্ন এবং সর্বোচ্চ AUC মান উপস্থাপন করে।বিন্দুযুক্ত রেখাটি 27টি নির্বাচিত বায়োমার্কারের সাথে সেরা মডেল নির্দেশ করে।AUC, রিসিভার অপারেটিং চরিত্রগত (ROC) বক্ররেখার অধীনে এলাকা।c ডিসকভারি গ্রুপে বিএন গ্রুপের তুলনায় এলএ গ্রুপে 27টি নির্বাচিত বিপাকের পরিবর্তনগুলি ভাঁজ করুন।লাল কলাম - সক্রিয়করণ।নীল কলাম একটি পতন.d–f রিসিভার অপারেটিং চরিত্রগত (ROC) বক্ররেখাগুলি আবিষ্কার, অভ্যন্তরীণ এবং বাহ্যিক বৈধতা সেটে 27 বিপাকের সংমিশ্রণের উপর ভিত্তি করে বৈষম্যমূলক মডেলের শক্তি দেখায়।উৎস তথ্য উৎস তথ্য ফাইল আকারে প্রদান করা হয়.
এই 27টি বিপাকের ওজনযুক্ত রিগ্রেশন সহগগুলির উপর ভিত্তি করে একটি ভবিষ্যদ্বাণী মডেল তৈরি করা হয়েছিল (পরিপূরক সারণী 3)।এই 27টি বিপাকের উপর ভিত্তি করে ROC বিশ্লেষণে 0.933 এর বক্ররেখা (AUC) মানের অধীনে একটি এলাকা পাওয়া গেছে, আবিষ্কার গ্রুপ সংবেদনশীলতা ছিল 0.868, এবং নির্দিষ্টতা ছিল 0.859 (চিত্র 2d)।ইতিমধ্যে, LA এবং HC-এর মধ্যে 38 টি টীকাযুক্ত ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইটগুলির মধ্যে, 16টি বিপাকের একটি সেট 0.801 এর সংবেদনশীলতার সাথে 0.902 এর একটি AUC অর্জন করেছে এবং এইচসি (পরিপূরক চিত্র 6a-c) থেকে LA বৈষম্যের ক্ষেত্রে 0.856 এর নির্দিষ্টতা অর্জন করেছে।ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইটের জন্য বিভিন্ন ভাঁজ পরিবর্তন থ্রেশহোল্ডের উপর ভিত্তি করে AUC মানগুলিও তুলনা করা হয়েছিল।আমরা দেখতে পেয়েছি যে শ্রেণীবিভাগ মডেলটি LA এবং BN (HC) এর মধ্যে বৈষম্যের ক্ষেত্রে সর্বোত্তম পারফর্ম করেছে যখন ভাঁজ পরিবর্তনের স্তরটি 1.2 বনাম 1.5 বা 2.0 এ সেট করা হয়েছিল (পরিপূরক চিত্র 7a,b)।27টি মেটাবোলাইট গোষ্ঠীর উপর ভিত্তি করে শ্রেণিবিন্যাস মডেলটি অভ্যন্তরীণ এবং বাহ্যিক দলগুলিতে আরও বৈধ করা হয়েছিল।অভ্যন্তরীণ বৈধতার জন্য AUC ছিল 0.915 (সংবেদনশীলতা 0.867, নির্দিষ্টতা 0.811) এবং বাহ্যিক বৈধতার জন্য 0.945 (সংবেদনশীলতা 0.810, নির্দিষ্টতা 0.979) (চিত্র 2e, f)।ইন্টারল্যাবরেটরি দক্ষতা মূল্যায়ন করার জন্য, বাহ্যিক দল থেকে 40টি নমুনা একটি বহিরাগত পরীক্ষাগারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল যেমন পদ্ধতি বিভাগে বর্ণিত হয়েছে।শ্রেণিবিন্যাস নির্ভুলতা 0.925 এর AUC অর্জন করেছে (পরিপূরক চিত্র 8)।যেহেতু ফুসফুসের স্কোয়ামাস সেল কার্সিনোমা (LUSC) ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা (LUAD) এর পরে নন-স্মল সেল লাং ক্যান্সারের (NSCLC) দ্বিতীয় সাধারণ উপপ্রকার, আমরা বিপাকীয় প্রোফাইলগুলির বৈধ সম্ভাব্য উপযোগিতাও পরীক্ষা করেছি।BN এবং LUSC এর ১৬টি মামলা।LUSC এবং BN-এর মধ্যে বৈষম্যের AUC ছিল 0.776 (পরিপূরক চিত্র 9), যা LUAD এবং BN-এর মধ্যে বৈষম্যের তুলনায় দরিদ্র ক্ষমতা নির্দেশ করে।
গবেষণায় দেখা গেছে যে সিটি ইমেজগুলিতে নোডুলের আকার ইতিবাচকভাবে ম্যালিগন্যান্সির সম্ভাবনার সাথে সম্পর্কযুক্ত এবং নোডুল চিকিত্সার প্রধান নির্ধারক রয়ে গেছে25,26,27।নেলসন স্ক্রীনিং স্টাডির বৃহৎ দল থেকে তথ্য বিশ্লেষণ করে দেখা গেছে যে নোড <5 মিমি সহ বিষয়গুলির মধ্যে ম্যালিগন্যান্সির ঝুঁকি 28 নোডবিহীন বিষয়গুলির মতোই ছিল।অতএব, ব্রিটিশ থোরাসিক সোসাইটি (বিটিএস) দ্বারা সুপারিশকৃত ন্যূনতম আকার হল 5 মিমি, যা নিয়মিত সিটি নিরীক্ষণের প্রয়োজন, এবং ফ্লিসনার সোসাইটি 29-এর সুপারিশ অনুসারে 6 মিমি।যাইহোক, 6 মিমি থেকে বড় এবং সুস্পষ্ট সৌম্য বৈশিষ্ট্য ব্যতীত, অনির্দিষ্ট পালমোনারি নোডুলস (IPN) বলা হয়, ক্লিনিকাল অনুশীলনে মূল্যায়ন এবং পরিচালনার ক্ষেত্রে একটি বড় চ্যালেঞ্জ রয়ে গেছে30,31।আমরা পরবর্তীতে অনুসন্ধান এবং অভ্যন্তরীণ বৈধতা দলগুলি থেকে পুল করা নমুনাগুলি ব্যবহার করে নডিউল আকার বিপাকীয় স্বাক্ষরগুলিকে প্রভাবিত করে কিনা তা পরীক্ষা করেছি।27টি বৈধ বায়োমার্কারের উপর ফোকাস করে, আমরা প্রথমে HC এবং BN সাব-6 মিমি মেটাবোলোমের পিসিএ প্রোফাইলগুলির তুলনা করি।আমরা দেখতে পেয়েছি যে এইচসি এবং বিএন-এর বেশিরভাগ ডেটা পয়েন্ট ওভারল্যাপ করা হয়েছে, এটি প্রমাণ করে যে সিরাম মেটাবোলাইট স্তর উভয় গ্রুপেই একই ছিল (চিত্র 3a)।বিভিন্ন আকারের পরিসর জুড়ে বৈশিষ্ট্য মানচিত্রগুলি BN এবং LA (চিত্র 3b, c) তে সংরক্ষিত ছিল, যেখানে 6-20 মিমি পরিসরে (চিত্র 3d) ম্যালিগন্যান্ট এবং সৌম্য নোডুলসের মধ্যে একটি বিচ্ছেদ পরিলক্ষিত হয়েছিল।এই দলটির একটি AUC 0.927, 0.868 এর নির্দিষ্টতা এবং 0.820 এর সংবেদনশীলতা ছিল 6 থেকে 20 মিমি (চিত্র 3e, f) পরিমাপের নোডুলগুলির ক্ষতিকারকতার পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য।আমাদের ফলাফলগুলি দেখায় যে ক্লাসিফায়ার নোডুল আকার নির্বিশেষে, প্রারম্ভিক ম্যালিগন্যান্ট রূপান্তর দ্বারা সৃষ্ট বিপাকীয় পরিবর্তনগুলি ক্যাপচার করতে পারে।
বিজ্ঞাপন 27 বিপাকীয় শ্রেণীবিন্যাসকারীর উপর ভিত্তি করে নির্দিষ্ট গ্রুপের মধ্যে PCA প্রোফাইলের তুলনা।CC এবং BN < 6 মিমি।b BN < 6 মিমি বনাম BN 6–20 মিমি।LA তে 6-20 মিমি বনাম LA 20-30 মিমি।g BN 6–20 মিমি এবং LA 6–20 মিমি।GC, n = 174;BN < 6 মিমি, n = 153;BN 6–20 মিমি, n = 91;LA 6–20 mm, n = 89;LA 20–30 mm, n = 77. e রিসিভার অপারেটিং চরিত্রগত (ROC) বক্ররেখা 6-20 মিমি নডিউলগুলির জন্য বৈষম্যমূলক মডেলের কার্যকারিতা দেখাচ্ছে।f সম্ভাব্যতার মানগুলি 6-20 মিমি পরিমাপের নোডুলগুলির জন্য লজিস্টিক রিগ্রেশন মডেলের উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল।ধূসর ডটেড লাইনটি সর্বোত্তম কাটঅফ মান (0.455) উপস্থাপন করে।উপরের সংখ্যাগুলি লস অ্যাঞ্জেলেসের জন্য প্রক্ষিপ্ত কেসের শতাংশের প্রতিনিধিত্ব করে।একটি দুই-টেইলড স্টুডেন্টস টি পরীক্ষা ব্যবহার করুন।পিসিএ, প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ।বক্ররেখার নিচে AUC এলাকা।উৎস তথ্য উৎস তথ্য ফাইল আকারে প্রদান করা হয়.
প্রস্তাবিত ম্যালিগন্যান্সি ভবিষ্যদ্বাণী মডেল (চিত্র 4a, b) এর কার্যকারিতা চিত্রিত করার জন্য অনুরূপ পালমোনারি নডিউল আকারের (7-9 মিমি) চারটি নমুনা (44-61 বছর বয়সী) আরও নির্বাচন করা হয়েছিল।প্রাথমিক স্ক্রীনিং-এ, কেস 1 ক্যালসিফিকেশন সহ একটি কঠিন নোডিউল হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছে, একটি সৌম্যের সাথে যুক্ত একটি বৈশিষ্ট্য, যেখানে কেস 2 একটি অনির্দিষ্ট আংশিকভাবে কঠিন নোডিউল হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে যেখানে কোনও সুস্পষ্ট সৌম্য বৈশিষ্ট্য নেই।তিন দফা ফলো-আপ সিটি স্ক্যান দেখায় যে এই কেসগুলি 4-বছরের সময়কাল ধরে স্থিতিশীল ছিল এবং তাই সৌম্য নোডুলস হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল (চিত্র 4a)।সিরিয়াল সিটি স্ক্যানের ক্লিনিকাল মূল্যায়নের সাথে তুলনা করে, বর্তমান ক্লাসিফায়ার মডেলের সাথে একক-শট সিরাম মেটাবোলাইট বিশ্লেষণ সম্ভাব্য সীমাবদ্ধতার উপর ভিত্তি করে এই সৌম্য নোডুলগুলিকে দ্রুত এবং সঠিকভাবে চিহ্নিত করেছে (সারণী 1)।চিত্র 4b ক্ষেত্রে 3 তে প্লুরাল রিট্র্যাকশনের লক্ষণ সহ একটি নডিউল দেখায়, যা প্রায়শই ম্যালিগন্যান্সি32 এর সাথে যুক্ত।কেস 4 একটি সৌম্য কারণের কোন প্রমাণ ছাড়াই একটি অনিশ্চিত আংশিকভাবে কঠিন নডিউল হিসাবে উপস্থাপিত।ক্লাসিফায়ার মডেল (সারণী 1) অনুসারে এই সমস্ত ক্ষেত্রে ম্যালিগন্যান্ট হিসাবে ভবিষ্যদ্বাণী করা হয়েছিল।ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমার মূল্যায়ন ফুসফুসের রিসেকশন সার্জারির পরে হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরীক্ষা দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছিল (চিত্র 4বি)।বাহ্যিক বৈধতা সেটের জন্য, বিপাকীয় শ্রেণিবিন্যাসকারী 6 মিমি (পরিপূরক চিত্র 10) এর চেয়ে বড় অনির্দিষ্ট ফুসফুসের নোডুলের দুটি ক্ষেত্রে সঠিকভাবে পূর্বাভাস দিয়েছে।
সৌম্য নোডুলসের দুটি ক্ষেত্রে ফুসফুসের অক্ষীয় জানালার সিটি চিত্র।ক্ষেত্রে 1, 4 বছর পর সিটি স্ক্যানে ডান নীচের লোবে ক্যালসিফিকেশন সহ 7 মিমি পরিমাপের একটি স্থিতিশীল কঠিন নডিউল দেখায়।ক্ষেত্রে 2, CT স্ক্যান 5 বছর পরে ডান উপরের লোবে 7 মিমি ব্যাস সহ একটি স্থিতিশীল, আংশিকভাবে শক্ত নোডুল প্রকাশ করে।b ফুসফুসের অক্ষীয় উইন্ডো সিটি চিত্র এবং ফুসফুসের রিসেকশনের আগে স্টেজ I অ্যাডেনোকার্সিনোমার দুটি ক্ষেত্রে সংশ্লিষ্ট প্যাথলজিকাল স্টাডিজ।কেস 3 প্লুরাল রিট্র্যাকশন সহ ডান উপরের লোবে 8 মিমি ব্যাস সহ একটি নডিউল প্রকাশ করেছে।কেস 4 বাম উপরের লোবে 9 মিমি পরিমাপের একটি আংশিকভাবে শক্ত গ্রাউন্ড-গ্লাস নোডুল প্রকাশ করেছে।হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (H&E) ক্ষয়প্রাপ্ত ফুসফুসের টিস্যুর দাগ (স্কেল বার = 50 μm) ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমার অ্যাকিনার বৃদ্ধির ধরণ প্রদর্শন করে।তীরগুলি সিটি চিত্রগুলিতে সনাক্ত করা নোডুলগুলি নির্দেশ করে।H&E চিত্রগুলি প্যাথলজিস্ট দ্বারা পরীক্ষা করা একাধিক (>3) মাইক্রোস্কোপিক ক্ষেত্রের প্রতিনিধি চিত্র।
একসাথে নেওয়া, আমাদের ফলাফলগুলি পালমোনারি নোডুলসের ডিফারেনশিয়াল নির্ণয়ের ক্ষেত্রে সিরাম মেটাবোলাইট বায়োমার্কারের সম্ভাব্য মান প্রদর্শন করে, যা সিটি স্ক্রীনিং মূল্যায়ন করার সময় চ্যালেঞ্জ তৈরি করতে পারে।
একটি বৈধ ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলাইট প্যানেলের উপর ভিত্তি করে, আমরা প্রধান বিপাকীয় পরিবর্তনগুলির জৈবিক সম্পর্ক সনাক্ত করার চেষ্টা করেছি।MetaboAnalyst দ্বারা KEGG পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ দুটি প্রদত্ত গ্রুপের মধ্যে 6টি সাধারণ উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত পথ চিহ্নিত করেছে (LA বনাম. HC এবং LA বনাম BN, সামঞ্জস্য করা p ≤ 0.001, প্রভাব > 0.01)।এই পরিবর্তনগুলি পাইরুভেট বিপাক, ট্রিপটোফান বিপাক, নিয়াসিন এবং নিকোটিনামাইড বিপাক, গ্লাইকোলাইসিস, টিসিএ চক্র এবং পিউরিন বিপাক (চিত্র 5a) এর ব্যাঘাত দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল।তারপরে আমরা পরম পরিমাণ নির্ধারণ ব্যবহার করে বড় পরিবর্তনগুলি যাচাই করতে লক্ষ্যযুক্ত বিপাকবিদ্যা সম্পাদন করেছি।খাঁটি মেটাবোলাইট মান ব্যবহার করে ট্রিপল কোয়াড্রপোল ভর স্পেকট্রোমেট্রি (QQQ) দ্বারা সাধারণভাবে পরিবর্তিত পথে সাধারণ বিপাক নির্ণয়।মেটাবোলোমিক্স অধ্যয়নের লক্ষ্য নমুনার জনসংখ্যার বৈশিষ্ট্যগুলি পরিপূরক সারণী 4-তে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছে। আমাদের বিশ্বব্যাপী বিপাক ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, পরিমাণগত বিশ্লেষণ নিশ্চিত করেছে যে হাইপোক্সানথাইন এবং জ্যান্থাইন, পাইরুভেট এবং ল্যাকটেট বিএন এবং এইচসি (চিত্র, 5বি, সি) এর তুলনায় এলএ-তে বৃদ্ধি পেয়েছে। p <0.05)।যাইহোক, BN এবং HC এর মধ্যে এই বিপাকগুলিতে কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া যায়নি।
বিএন এবং এইচসি গ্রুপের তুলনায় এলএ গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন বিপাকের কেইজিজি পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ।একটি দুই-টেইলড গ্লোবালটেস্ট ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং p মানগুলি Holm-Bonferroni পদ্ধতি ব্যবহার করে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল (অ্যাডজাস্ট করা p ≤ 0.001 এবং প্রভাবের আকার > 0.01)।b–d বেহালা প্লট LC-MS/MS দ্বারা নির্ধারিত সিরাম HC, BN, এবং LA-তে হাইপোক্সানথাইন, জ্যান্থাইন, ল্যাকটেট, পাইরুভেট, এবং ট্রিপটোফ্যানের মাত্রা দেখাচ্ছে (এন = 70 প্রতি গ্রুপ)।সাদা এবং কালো বিন্দুযুক্ত রেখাগুলি যথাক্রমে মধ্যমা এবং চতুর্থিক নির্দেশ করে।e বেহালা প্লট LUAD-TCGA ডেটাসেটে স্বাভাবিক ফুসফুসের টিস্যু (n = 59) এর তুলনায় ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা (n = 513) এ SLC7A5 এবং QPRT-এর স্বাভাবিক Log2TPM (প্রতি মিলিয়ন প্রতি ট্রান্সক্রিপ্ট) mRNA এক্সপ্রেশন দেখাচ্ছে।সাদা বাক্সটি ইন্টারকোয়ার্টাইল রেঞ্জের প্রতিনিধিত্ব করে, কেন্দ্রের অনুভূমিক কালো রেখাটি মধ্যকে প্রতিনিধিত্ব করে এবং বাক্স থেকে প্রসারিত উল্লম্ব কালো রেখাটি 95% আত্মবিশ্বাসের ব্যবধান (CI) প্রতিনিধিত্ব করে।f TCGA ডেটাসেটে ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা (n = 513) এবং স্বাভাবিক ফুসফুসের টিস্যু (n = 59) এ SLC7A5 এবং GAPDH এক্সপ্রেশনের পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক প্লট।ধূসর এলাকা 95% CI প্রতিনিধিত্ব করে।r, পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ।g LC-MS/MS দ্বারা নির্ধারিত অ-নির্দিষ্ট shRNA কন্ট্রোল (NC) এবং shSLC7A5 (Sh1, Sh2) দ্বারা স্থানান্তরিত A549 কোষে সাধারণ সেলুলার ট্রিপটোফ্যানের মাত্রা।প্রতিটি গ্রুপে পাঁচটি জৈবিকভাবে স্বাধীন নমুনার পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ উপস্থাপন করা হয়েছে।h A549 কোষ (NC) এবং SLC7A5 নকডাউন A549 কোষে (Sh1, Sh2) NADt এর সেলুলার স্তর (NAD+ এবং NADH সহ মোট NAD)।প্রতিটি গ্রুপে তিনটি জৈবিকভাবে স্বাধীন নমুনার পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ উপস্থাপন করা হয়েছে।i SLC7A5 নকডাউনের আগে এবং পরে A549 কোষের গ্লাইকোলাইটিক কার্যকলাপ এক্সট্রা সেলুলার অ্যাসিডিফিকেশন রেট (ECAR) (n = 4 গ্রুপ প্রতি জৈবিকভাবে স্বাধীন নমুনা) দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।2-ডিজি, 2-ডিঅক্সি-ডি-গ্লুকোজ।টু-টেইলড স্টুডেন্টস টি পরীক্ষা (b–h) এ ব্যবহার করা হয়েছিল।(g–i), ত্রুটি বারগুলি গড় ± SD প্রতিনিধিত্ব করে, প্রতিটি পরীক্ষা তিনবার স্বাধীনভাবে সঞ্চালিত হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি একই রকম ছিল।উৎস তথ্য উৎস তথ্য ফাইল আকারে প্রদান করা হয়.
এলএ গ্রুপে পরিবর্তিত ট্রিপটোফান বিপাকের উল্লেখযোগ্য প্রভাব বিবেচনা করে, আমরা কিউকিউকিউ ব্যবহার করে এইচসি, বিএন এবং এলএ গ্রুপে সিরাম ট্রিপটোফান স্তরগুলিও মূল্যায়ন করেছি।আমরা দেখতে পেয়েছি যে এইচসি বা বিএন (p <0.001, চিত্র 5d) এর তুলনায় এলএ-তে সিরাম ট্রিপটোফ্যান হ্রাস পেয়েছে, যা পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে ফুসফুসের ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের মধ্যে সঞ্চালনকারী ট্রিপটোফ্যানের মাত্রা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের তুলনায় কম 33,34 ,35।PET/CT ট্রেসার 11C-methyl-L-tryptophan ব্যবহার করে আরেকটি গবেষণায় দেখা গেছে যে ফুসফুসের ক্যান্সারের টিস্যুতে ট্রিপটোফ্যান সংকেত ধরে রাখার সময় সৌম্য ক্ষত বা স্বাভাবিক টিস্যুর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে।আমরা অনুমান করি যে এলএ সিরামে ট্রিপটোফ্যানের হ্রাস ফুসফুসের ক্যান্সার কোষ দ্বারা সক্রিয় ট্রিপটোফান গ্রহণকে প্রতিফলিত করতে পারে।
এটি আরও জানা যায় যে ট্রিপটোফান ক্যাটাবোলিজমের কাইনুরেনাইন পথের শেষ পণ্য হল NAD+37,38, যা গ্লাইকোলাইসিসে 1,3-বিসফসফোগ্লিসারেটের সাথে গ্লিসারালডিহাইড-3-ফসফেটের প্রতিক্রিয়ার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ স্তর।যদিও পূর্ববর্তী গবেষণাগুলি ইমিউন নিয়ন্ত্রণে ট্রিপটোফান ক্যাটাবোলিজমের ভূমিকার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছে, আমরা বর্তমান গবেষণায় পরিলক্ষিত ট্রিপটোফান ডিসরেগুলেশন এবং গ্লাইকোলাইটিক পথগুলির মধ্যে ইন্টারপ্লেকে ব্যাখ্যা করার চেষ্টা করেছি।সলিউট ট্রান্সপোর্টার ফ্যামিলি 7 সদস্য 5 (SLC7A5) একটি ট্রিপটোফ্যান ট্রান্সপোর্টার 43,44,45 হিসাবে পরিচিত।কুইনোলিনিক অ্যাসিড ফসফরিবোসিলট্রান্সফেরেজ (কিউপিআরটি) হল একটি এনজাইম যা কাইনুরেনাইন পথের নিচের দিকে অবস্থিত যা কুইনোলিনিক অ্যাসিডকে NAMN46 এ রূপান্তর করে।LUAD TCGA ডেটাসেটের পরিদর্শন থেকে জানা যায় যে SLC7A5 এবং QPRT উভয়ই টিউমার টিস্যুতে সাধারণ টিস্যুর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে আপ-রেগুলেটেড ছিল (চিত্র 5e)।এই বৃদ্ধিটি পর্যায় I এবং II এর পাশাপাশি ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা (পরিপূরক চিত্র 11) এর তৃতীয় এবং চতুর্থ ধাপে দেখা গেছে, যা টিউমারিজেনেসিসের সাথে যুক্ত ট্রিপটোফান বিপাকের প্রাথমিক ব্যাঘাতকে নির্দেশ করে।
অতিরিক্তভাবে, LUAD-TCGA ডেটাসেট ক্যান্সার রোগীর নমুনাগুলিতে SLC7A5 এবং GAPDH mRNA এক্সপ্রেশনের মধ্যে একটি ইতিবাচক সম্পর্ক দেখিয়েছে (r = 0.45, p = 1.55E-26, চিত্র 5f)।বিপরীতে, স্বাভাবিক ফুসফুসের টিস্যুতে (r = 0.25, p = 0.06, চিত্র 5f) এই ধরনের জিনের স্বাক্ষরগুলির মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক পাওয়া যায়নি।A549 কোষে SLC7A5 (পরিপূরক চিত্র 12) এর নকডাউন উল্লেখযোগ্যভাবে সেলুলার ট্রিপটোফান এবং NAD(H) মাত্রা (চিত্র 5g,h) হ্রাস করেছে, যার ফলে এক্সট্রা সেলুলার অ্যাসিডিফিকেশন রেট (ECAR) (চিত্র 1) দ্বারা পরিমাপ করা গ্লাইকোলাইটিক ক্রিয়াকলাপ হ্রাস পেয়েছে।5i)।এইভাবে, সিরামের বিপাকীয় পরিবর্তন এবং ভিট্রো সনাক্তকরণের উপর ভিত্তি করে, আমরা অনুমান করি যে ট্রিপটোফান বিপাক কিনুরেনাইন পথের মাধ্যমে NAD + তৈরি করতে পারে এবং ফুসফুসের ক্যান্সারে গ্লাইকোলাইসিস প্রচারে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে।
গবেষণায় দেখা গেছে যে LDCT দ্বারা শনাক্ত হওয়া অনির্দিষ্ট পালমোনারি নোডুলগুলির একটি বৃহৎ সংখ্যক অতিরিক্ত পরীক্ষার প্রয়োজন হতে পারে যেমন PET-CT, ফুসফুসের বায়োপসি, এবং ম্যালিগন্যান্সির মিথ্যা-ইতিবাচক নির্ণয়ের কারণে ওভারট্রিটমেন্ট। 31 চিত্র 6-এ দেখানো হয়েছে, আমাদের গবেষণায় সম্ভাব্য ডায়গনিস্টিক মান সহ সিরাম বিপাকের একটি প্যানেল চিহ্নিত করা হয়েছে যা CT দ্বারা শনাক্ত করা পালমোনারি নডিউলগুলির ঝুঁকি স্তরবিন্যাস এবং পরবর্তী ব্যবস্থাপনার উন্নতি করতে পারে।
পালমোনারি নোডুলগুলি লো-ডোজ কম্পিউটেড টমোগ্রাফি (এলডিসিটি) ব্যবহার করে সৌম্য বা ম্যালিগন্যান্ট কারণের ইমেজিং বৈশিষ্ট্য সহ মূল্যায়ন করা হয়।নোডুলসের অনিশ্চিত ফলাফল ঘন ঘন ফলো-আপ ভিজিট, অপ্রয়োজনীয় হস্তক্ষেপ এবং অতিরিক্ত চিকিত্সার দিকে নিয়ে যেতে পারে।ডায়গনিস্টিক মানের সাথে সিরাম বিপাকীয় শ্রেণীবদ্ধকরণের অন্তর্ভুক্তি ঝুঁকি মূল্যায়ন এবং পালমোনারি নোডুলসের পরবর্তী ব্যবস্থাপনার উন্নতি করতে পারে।পিইটি পজিট্রন নির্গমন টমোগ্রাফি।
ইউএস এনএলএসটি অধ্যয়ন এবং ইউরোপীয় নেলসন অধ্যয়নের তথ্য থেকে জানা যায় যে কম-ডোজ কম্পিউটেড টমোগ্রাফি (এলডিসিটি) সহ উচ্চ-ঝুঁকিপূর্ণ গোষ্ঠীগুলির স্ক্রীনিং ফুসফুসের ক্যান্সারের মৃত্যুহার 1,3 হ্রাস করতে পারে।যাইহোক, এলডিসিটি দ্বারা শনাক্ত হওয়া বিপুল সংখ্যক আনুষঙ্গিক পালমোনারি নডিউলগুলির ঝুঁকি মূল্যায়ন এবং পরবর্তী ক্লিনিকাল ব্যবস্থাপনা সবচেয়ে চ্যালেঞ্জিং রয়ে গেছে।প্রধান লক্ষ্য হল নির্ভরযোগ্য বায়োমার্কারগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করে বিদ্যমান LDCT-ভিত্তিক প্রোটোকলগুলির সঠিক শ্রেণিবিন্যাস অপ্টিমাইজ করা।
কিছু আণবিক বায়োমার্কার, যেমন রক্তের বিপাক, সুস্থ নিয়ন্ত্রণের সাথে ফুসফুসের ক্যান্সারের তুলনা করে সনাক্ত করা হয়েছে 15,17।বর্তমান গবেষণায়, আমরা LDCT দ্বারা ঘটনাক্রমে সনাক্ত করা সৌম্য এবং ম্যালিগন্যান্ট পালমোনারি নোডুলগুলির মধ্যে পার্থক্য করার জন্য সিরাম মেটাবোলোমিক্স বিশ্লেষণের প্রয়োগের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছি।আমরা ইউপিএলসি-এইচআরএমএস বিশ্লেষণ ব্যবহার করে স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণের গ্লোবাল সিরাম মেটাবোলোম (এইচসি), সৌম্য ফুসফুসের নোডুলস (বিএন), এবং স্টেজ I ফুসফুস অ্যাডেনোকার্সিনোমা (এলএ) নমুনাগুলির সাথে তুলনা করেছি।আমরা দেখতে পেয়েছি যে এইচসি এবং বিএন-এর অনুরূপ বিপাকীয় প্রোফাইল রয়েছে, যেখানে এলএ এইচসি এবং বিএন-এর তুলনায় উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন দেখিয়েছে।আমরা দুটি সেট সিরাম বিপাক সনাক্ত করেছি যা এইচসি এবং বিএন থেকে এলএকে আলাদা করে।
সৌম্য এবং ম্যালিগন্যান্ট নোডুলগুলির জন্য বর্তমান LDCT-ভিত্তিক শনাক্তকরণ স্কিমটি প্রধানত সময়ের 30 এর সাথে নোডুলগুলির আকার, ঘনত্ব, আকারবিদ্যা এবং বৃদ্ধির হারের উপর ভিত্তি করে।পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে নুডুলসের আকার ফুসফুসের ক্যান্সারের সম্ভাবনার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত।এমনকি উচ্চ-ঝুঁকির রোগীদের মধ্যেও, নোড <6 মিমি <1% এর মধ্যে ম্যালিগন্যান্সির ঝুঁকি।6 থেকে 20 মিমি পরিমাপের নডিউলগুলির জন্য ম্যালিগন্যান্সির ঝুঁকি 8% থেকে 64%30 পর্যন্ত।তাই, Fleischner সোসাইটি রুটিন CT ফলো-আপের জন্য 6 মিমি কাটঅফ ব্যাস সুপারিশ করে।29 যাইহোক, 6 মিমি থেকে বড় অনির্দিষ্ট পালমোনারি নোডুলস (আইপিএন) এর ঝুঁকি মূল্যায়ন এবং ব্যবস্থাপনা পর্যাপ্তভাবে সম্পন্ন করা হয়নি 31।জন্মগত হৃদরোগের বর্তমান ব্যবস্থাপনা সাধারণত ঘন ঘন সিটি নিরীক্ষণের সাথে সজাগ অপেক্ষার উপর ভিত্তি করে।
বৈধ মেটাবোলোমের উপর ভিত্তি করে, আমরা প্রথমবারের মতো সুস্থ ব্যক্তি এবং সৌম্য নোডুলস <6 মিমি মধ্যে বিপাকীয় স্বাক্ষরের ওভারল্যাপ প্রদর্শন করেছি।জৈবিক মিল পূর্ববর্তী CT অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে নোডুলস <6 মিমি এর জন্য ক্ষতিকারকতার ঝুঁকি নোডবিহীন বিষয়ের মতো কম।30 এটি উল্লেখ করা উচিত যে আমাদের ফলাফলগুলিও দেখায় যে সৌম্য নোডুলস <6 মিমি এবং ≥6 মিমি উচ্চ বিপাকীয় প্রোফাইলে সাদৃশ্য, পরামর্শ দেয় যে সৌম্য ইটিওলজির কার্যকরী সংজ্ঞা নোডুল আকার নির্বিশেষে সামঞ্জস্যপূর্ণ।এইভাবে, আধুনিক ডায়গনিস্টিক সিরাম মেটাবোলাইট প্যানেলগুলি একটি নিয়ম-আউট পরীক্ষা হিসাবে একটি একক অ্যাস প্রদান করতে পারে যখন প্রাথমিকভাবে সিটিতে নোডুলগুলি সনাক্ত করা হয় এবং সম্ভাব্যভাবে সিরিয়াল পর্যবেক্ষণ হ্রাস করে।একই সময়ে, বিপাকীয় বায়োমার্কারগুলির একই প্যানেল সৌম্য নোডুলস থেকে ম্যালিগন্যান্ট নোডুল ≥6 মিমি আকারের পার্থক্য করেছে এবং একই আকারের আইপিএনগুলির জন্য সঠিক ভবিষ্যদ্বাণী এবং সিটি ইমেজে অস্পষ্ট আকারগত বৈশিষ্ট্যগুলি প্রদান করেছে।এই সিরাম মেটাবলিজম ক্লাসিফায়ার 0.927 এর AUC সহ নোডুল ≥6 মিমি এর ক্ষতিকারকতার পূর্বাভাস দিতে ভাল পারফর্ম করেছে।একসাথে নেওয়া, আমাদের ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে অনন্য সিরাম বিপাকীয় স্বাক্ষরগুলি বিশেষভাবে প্রাথমিকভাবে টিউমার-প্ররোচিত বিপাকীয় পরিবর্তনগুলিকে প্রতিফলিত করতে পারে এবং নোডুল আকারের থেকে স্বতন্ত্র ঝুঁকি ভবিষ্যদ্বাণী হিসাবে সম্ভাব্য মান থাকতে পারে।
উল্লেখযোগ্যভাবে, ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা (LUAD) এবং স্কোয়ামাস সেল কার্সিনোমা (LUSC) হল প্রধান ধরনের নন-স্মল সেল ফুসফুস ক্যান্সার (NSCLC)।প্রদত্ত যে LUSC তামাক ব্যবহারের সাথে দৃঢ়ভাবে যুক্ত 47 এবং LUAD হল CT স্ক্রীনিং 48-এ শনাক্ত হওয়া আনুষঙ্গিক ফুসফুসের নোডুলগুলির সবচেয়ে সাধারণ হিস্টোলজি, আমাদের ক্লাসিফায়ার মডেলটি বিশেষভাবে স্টেজ I অ্যাডেনোকার্সিনোমা নমুনার জন্য তৈরি করা হয়েছিল।ওয়াং এবং সহকর্মীরাও LUAD এর উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছেন এবং সুস্থ ব্যক্তিদের থেকে প্রাথমিক পর্যায়ের ফুসফুসের ক্যান্সারকে আলাদা করতে লিপিডমিক্স ব্যবহার করে নয়টি লিপিড স্বাক্ষর চিহ্নিত করেছেন।আমরা পর্যায় I LUSC এবং 74 টি সৌম্য নোডুলসের 16 টি ক্ষেত্রে বর্তমান ক্লাসিফায়ার মডেলটি পরীক্ষা করেছি এবং নিম্ন LUSC পূর্বাভাস নির্ভুলতা (AUC 0.776) পর্যবেক্ষণ করেছি, পরামর্শ দিয়েছি যে LUAD এবং LUSC-এর নিজস্ব বিপাকীয় স্বাক্ষর থাকতে পারে।প্রকৃতপক্ষে, LUAD এবং LUSC-এর মধ্যে এটিওলজি, জৈবিক উত্স এবং জেনেটিক বিকৃতির মধ্যে পার্থক্য দেখানো হয়েছে।অতএব, স্ক্রীনিং প্রোগ্রামগুলিতে ফুসফুসের ক্যান্সারের জনসংখ্যা-ভিত্তিক সনাক্তকরণের জন্য প্রশিক্ষণ মডেলগুলিতে অন্যান্য ধরণের হিস্টোলজি অন্তর্ভুক্ত করা উচিত।
এখানে, আমরা স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ এবং সৌম্য নোডুলসের তুলনায় ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমার ছয়টি ঘন ঘন পরিবর্তিত পথ চিহ্নিত করেছি।জ্যান্থাইন এবং হাইপোক্সানথিন হল পিউরিন বিপাকীয় পথের সাধারণ বিপাক।আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা আক্রান্ত রোগীদের সিরাম বা টিস্যুতে পিউরিন বিপাকের সাথে যুক্ত মধ্যবর্তীগুলি স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ বা প্রি-ইনভাসিভ পর্যায়ে 15,50 রোগীদের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে।উচ্চতর সিরাম জ্যান্থাইন এবং হাইপোক্সান্থাইন স্তরগুলি দ্রুত ক্যান্সার কোষের বিস্তারের জন্য প্রয়োজনীয় অ্যানাবোলিজমকে প্রতিফলিত করতে পারে।গ্লুকোজ বিপাকের অনিয়ন্ত্রণ ক্যান্সার বিপাকের একটি সুপরিচিত বৈশিষ্ট্য 51।এখানে, আমরা এইচসি এবং বিএন গ্রুপের তুলনায় এলএ গ্রুপে পাইরুভেট এবং ল্যাকটেটের উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি লক্ষ্য করেছি, যা নন-স্মল সেল ফুসফুস ক্যান্সার (এনএসসিএলসি) রোগীদের সিরাম মেটাবোলোম প্রোফাইলে গ্লাইকোলাইটিক পাথওয়ে অস্বাভাবিকতার পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ।ফলাফল সামঞ্জস্যপূর্ণ 52,53.
গুরুত্বপূর্ণভাবে, আমরা ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাসের সিরামে পাইরুভেট এবং ট্রিপটোফান বিপাকের মধ্যে একটি বিপরীত সম্পর্ক পর্যবেক্ষণ করেছি।এইচসি বা বিএন গ্রুপের তুলনায় এলএ গ্রুপে সিরাম ট্রিপটোফ্যানের মাত্রা হ্রাস করা হয়েছিল।মজার বিষয় হল, একটি সম্ভাব্য দল ব্যবহার করে পূর্ববর্তী বৃহৎ মাপের সমীক্ষায় দেখা গেছে যে কম মাত্রার ট্রিপটোফান ফুসফুসের ক্যান্সারের ঝুঁকি বাড়ার সাথে যুক্ত ছিল।ট্রিপটোফ্যান একটি অপরিহার্য অ্যামিনো অ্যাসিড যা আমরা সম্পূর্ণরূপে খাদ্য থেকে পাই।আমরা উপসংহারে পৌঁছেছি যে ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাতে সিরাম ট্রিপটোফান হ্রাস এই বিপাকটির দ্রুত হ্রাসকে প্রতিফলিত করতে পারে।এটা সুপরিচিত যে কাইনুরেনাইন পথের মাধ্যমে ট্রিপটোফান ক্যাটাবলিজমের শেষ পণ্য হল ডি নভো NAD+ সংশ্লেষণের উৎস।যেহেতু NAD+ প্রাথমিকভাবে উদ্ধার পথের মাধ্যমে উত্পাদিত হয়, তাই স্বাস্থ্য ও রোগের ক্ষেত্রে ট্রিপটোফান বিপাকের ক্ষেত্রে NAD+-এর গুরুত্ব নির্ধারণ করা বাকি আছে46।TCGA ডাটাবেসের আমাদের বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ট্রিপটোফ্যান ট্রান্সপোর্টার দ্রবণীয় ট্রান্সপোর্টার 7A5 (SLC7A5) এর অভিব্যক্তি ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাতে স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং গ্লাইকোলাইটিক এনজাইম GAPDH এর অভিব্যক্তির সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল।পূর্ববর্তী অধ্যয়নগুলি মূলত ট্রিপটোফান ক্যাটাবোলিজমের ভূমিকার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছে অ্যান্টিটিউমার প্রতিরোধী প্রতিক্রিয়া 40,41,42 দমনে।এখানে আমরা দেখাই যে ফুসফুসের ক্যান্সার কোষে SLC7A5 নকডাউনের মাধ্যমে ট্রিপটোফান গ্রহণে বাধা দেওয়ার ফলে পরবর্তীতে সেলুলার এনএডি মাত্রা কমে যায় এবং গ্লাইকোলাইটিক ক্রিয়াকলাপের সহগামী ক্ষয় হয়।সংক্ষেপে, আমাদের অধ্যয়ন ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমার ম্যালিগন্যান্ট রূপান্তরের সাথে যুক্ত সিরাম বিপাকের পরিবর্তনের জন্য একটি জৈবিক ভিত্তি প্রদান করে।
EGFR মিউটেশন হল NSCLC রোগীদের মধ্যে সবচেয়ে সাধারণ ড্রাইভার মিউটেশন।আমাদের গবেষণায়, আমরা দেখেছি যে EGFR মিউটেশন (n = 41) রোগীদের বন্য-টাইপ EGFR (n = 31) রোগীদের মতো সামগ্রিক বিপাকীয় প্রোফাইল ছিল, যদিও আমরা অ্যাসিলকারনিটাইন রোগীদের মধ্যে কিছু EGFR মিউট্যান্ট রোগীদের সিরামের মাত্রা হ্রাস পেয়েছি।অ্যাসিলকার্নিটাইনগুলির প্রতিষ্ঠিত কাজ হল সাইটোপ্লাজম থেকে অ্যাসিল গ্রুপগুলিকে মাইটোকন্ড্রিয়াল ম্যাট্রিক্সে পরিবহণ করা, যার ফলে ফ্যাটি অ্যাসিডের অক্সিডেশন শক্তি উৎপন্ন হয় 55।আমাদের অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, একটি সাম্প্রতিক গবেষণায় 102 ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা টিস্যু নমুনাগুলির গ্লোবাল মেটাবোলোম বিশ্লেষণ করে EGFR মিউট্যান্ট এবং EGFR বন্য-টাইপ টিউমারগুলির মধ্যে অনুরূপ মেটাবোলোম প্রোফাইলগুলি সনাক্ত করা হয়েছে।মজার বিষয় হল, ইজিএফআর মিউট্যান্ট গ্রুপেও অ্যাসিলকারনিটাইন সামগ্রী পাওয়া গেছে।অতএব, অ্যাসিলকার্নিটাইন স্তরের পরিবর্তনগুলি ইজিএফআর-প্ররোচিত বিপাকীয় পরিবর্তনগুলিকে প্রতিফলিত করে কিনা এবং অন্তর্নিহিত আণবিক পথগুলি আরও অধ্যয়নের যোগ্যতা অর্জন করতে পারে।
উপসংহারে, আমাদের অধ্যয়নটি পালমোনারি নোডুলসের ডিফারেনশিয়াল নির্ণয়ের জন্য একটি সিরাম বিপাকীয় শ্রেণিবদ্ধকারী স্থাপন করে এবং একটি কর্মপ্রবাহের প্রস্তাব করে যা ঝুঁকি মূল্যায়নকে অপ্টিমাইজ করতে পারে এবং সিটি স্ক্যান স্ক্রীনিংয়ের উপর ভিত্তি করে ক্লিনিকাল ব্যবস্থাপনাকে সহজতর করতে পারে।
এই গবেষণাটি সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার হাসপাতালের নীতিশাস্ত্র কমিটি, সান ইয়াত-সেন বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রথম অনুমোদিত হাসপাতাল এবং ঝেংঝো ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার হাসপাতালের নীতিশাস্ত্র কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।আবিষ্কার এবং অভ্যন্তরীণ বৈধতা গোষ্ঠীতে, সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টার, সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টারে ক্যান্সার নিয়ন্ত্রণ ও প্রতিরোধ বিভাগে বার্ষিক চিকিৎসা পরীক্ষা করা ব্যক্তিদের কাছ থেকে সুস্থ ব্যক্তিদের থেকে 174টি সেরা এবং সৌম্য নোডুলস থেকে 244টি সেরা সংগ্রহ করা হয়েছিল।সিরামপর্যায় I ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমাগুলি সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টার থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল।বাহ্যিক বৈধতা গোষ্ঠীতে, সৌম্য নোডুলসের 48 টি কেস, সান ইয়াত-সেন বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রথম অধিভুক্ত হাসপাতাল থেকে 39 টি স্টেজ ফুসফুস অ্যাডেনোকার্সিনোমা এবং ঝেংঝো ক্যান্সার হাসপাতাল থেকে স্টেজ I ফুসফুস অ্যাডেনোকার্সিনোমার 24 টি কেস ছিল।সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টারও প্রতিষ্ঠিত বিপাকীয় শ্রেণীবিন্যাসকারীর ডায়াগনস্টিক ক্ষমতা পরীক্ষা করার জন্য প্রথম পর্যায়ের স্কোয়ামাস সেল ফুসফুসের ক্যান্সারের 16 টি কেস সংগ্রহ করেছে (রোগীর বৈশিষ্ট্যগুলি পরিপূরক সারণী 5 এ দেখানো হয়েছে)।আবিষ্কার কোহর্ট এবং অভ্যন্তরীণ বৈধতা দল থেকে নমুনাগুলি জানুয়ারী 2018 এবং মে 2020 এর মধ্যে সংগ্রহ করা হয়েছিল। বহিরাগত বৈধকরণ কোহর্টের নমুনাগুলি আগস্ট 2021 এবং অক্টোবর 2022 এর মধ্যে সংগ্রহ করা হয়েছিল। লিঙ্গ পক্ষপাত কমানোর জন্য, প্রতিটি ক্ষেত্রে প্রায় সমান সংখ্যক পুরুষ এবং মহিলাকে বরাদ্দ করা হয়েছিল দলডিসকভারি টিম এবং ইন্টারনাল রিভিউ টিম।অংশগ্রহণকারী লিঙ্গ স্ব-প্রতিবেদনের উপর ভিত্তি করে নির্ধারণ করা হয়েছিল।সমস্ত অংশগ্রহণকারীদের কাছ থেকে অবহিত সম্মতি নেওয়া হয়েছিল এবং কোনও ক্ষতিপূরণ দেওয়া হয়নি।সৌম্য নোডুলস সহ বিষয়গুলি হল বিশ্লেষণের সময় 2 থেকে 5 বছরের মধ্যে স্থিতিশীল সিটি স্ক্যান স্কোর সহ, বহিরাগত বৈধতা নমুনা থেকে 1টি কেস ব্যতীত, যা অপারেটিভভাবে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং হিস্টোপ্যাথলজি দ্বারা নির্ণয় করা হয়েছিল।ক্রনিক ব্রংকাইটিস বাদে।ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা কেসগুলি ফুসফুসের রিসেকশনের আগে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং প্যাথলজিকাল নির্ণয়ের দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল।উপবাসের রক্তের নমুনাগুলি সিরাম বিচ্ছেদ টিউবে কোনও অ্যান্টিকোয়ুল্যান্ট ছাড়াই সংগ্রহ করা হয়েছিল।রক্তের নমুনাগুলি ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য জমাটবদ্ধ করা হয়েছিল এবং তারপরে সিরাম সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করতে 4°C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য 2851 × g সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল।বিপাক নিষ্কাশন পর্যন্ত সিরাম অ্যালিকোটগুলি -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে হিমায়িত ছিল।সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটি ক্যান্সার সেন্টারের ক্যান্সার প্রতিরোধ ও চিকিৎসা পরীক্ষা বিভাগ 40 থেকে 55 বছর বয়সী সমান সংখ্যক পুরুষ ও মহিলা সহ 100 জন সুস্থ দাতার কাছ থেকে সিরামের একটি পুল সংগ্রহ করেছে।প্রতিটি দাতার নমুনার সমান ভলিউম মিশ্রিত করা হয়েছিল, ফলস্বরূপ পুলটি অ্যালিকোট করা হয়েছিল এবং -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।সিরাম মিশ্রণটি মান নিয়ন্ত্রণ এবং ডেটা মানককরণের জন্য রেফারেন্স উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।
রেফারেন্স সিরাম এবং পরীক্ষার নমুনাগুলি গলানো হয়েছিল এবং একটি সম্মিলিত নিষ্কাশন পদ্ধতি (MTBE/মিথানল/জল) 56 ব্যবহার করে বিপাকগুলি বের করা হয়েছিল।সংক্ষেপে, 50 μl সিরাম 225 μl বরফ-ঠান্ডা মিথানল এবং 750 μl বরফ-ঠাণ্ডা মিথাইল টারট-বুটাইল ইথার (MTBE) এর সাথে মিশ্রিত হয়েছিল।মিশ্রণটি নাড়ুন এবং 1 ঘন্টার জন্য বরফের উপর সেঁকুন।তারপরে নমুনাগুলিকে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 188 μl এমএস-গ্রেড জলের সাথে ঘূর্ণি মিশ্রিত করা হয়েছিল যার মধ্যে অভ্যন্তরীণ মান রয়েছে (13C-ল্যাকটেট, 13C3-পাইরুভেট, 13C-মেথিওনিন, এবং 13C6-আইসোলিউসিন, কেমব্রিজ আইসোটোপ ল্যাবরেটরিজ থেকে কেনা)।তারপরে মিশ্রণটিকে 15,000 × g 10 মিনিটের জন্য 4 °C তাপমাত্রায় কেন্দ্রীভূত করা হয়েছিল, এবং নিম্ন পর্যায়টি ইতিবাচক এবং নেতিবাচক মোডে এলসি-এমএস বিশ্লেষণের জন্য দুটি টিউবে (125 μL প্রতিটি) স্থানান্তরিত হয়েছিল।অবশেষে, নমুনাটি একটি উচ্চ-গতির ভ্যাকুয়াম কেন্দ্রীকরণে শুষ্কতায় বাষ্পীভূত হয়েছিল।
শুকনো বিপাকগুলিকে 80% অ্যাসিটোনিট্রাইলের 120 μl এ পুনর্গঠন করা হয়েছিল, 5 মিনিটের জন্য ঘূর্ণায়মান করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 10 মিনিটের জন্য 15,000 × গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল।বিপাকবিদ্যা অধ্যয়নের জন্য মাইক্রোইনসার্ট সহ সুপারন্যাট্যান্টগুলিকে অ্যাম্বার কাচের শিশিতে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল।একটি অতি-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-হাই-রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (UPLC-HRMS) প্ল্যাটফর্মে লক্ষ্যহীন বিপাকবিদ্যা বিশ্লেষণ।ডিওনেক্স আলটিমেট 3000 ইউপিএলসি সিস্টেম এবং একটি অ্যাক্যুইটি বিইএইচ অ্যামাইড কলাম (2.1 × 100 মিমি, 1.7 μm, জল) ব্যবহার করে মেটাবোলাইটগুলি পৃথক করা হয়েছিল।পজিটিভ আয়ন মোডে, মোবাইল ফেজগুলি ছিল 95% (A) এবং 50% অ্যাসিটোনিট্রিল (B), প্রতিটিতে 10 mmol/L অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট এবং 0.1% ফর্মিক অ্যাসিড রয়েছে।নেতিবাচক মোডে, মোবাইল ফেজ A এবং B তে যথাক্রমে 95% এবং 50% অ্যাসিটোনিট্রিল রয়েছে, উভয় পর্যায়ে 10 mmol/L অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট, pH = 9 রয়েছে। গ্রেডিয়েন্ট প্রোগ্রামটি নিম্নরূপ ছিল: 0-0.5 মিনিট, 2% B;0.5-12 মিনিট, 2-50% বি;12-14 মিনিট, 50-98% B;14-16 মিনিট, 98% বি;16-16.1।মিনিট, 98 –2% বি;16.1–20 মিনিট, 2% B. কলামটি 40°C এবং নমুনাটি 10°C-এ অটোস্যাম্পলারে বজায় রাখা হয়েছিল৷প্রবাহের হার ছিল 0.3 মিলি/মিনিট, ইনজেকশনের পরিমাণ ছিল 3 μl।ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ESI) উৎস সহ একটি Q-এক্স্যাক্টিভ অরবিট্র্যাপ ভর স্পেকট্রোমিটার (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) সম্পূর্ণ স্ক্যান মোডে পরিচালিত হয়েছিল এবং ddMS2 মনিটরিং মোডের সাথে বৃহৎ পরিমাণে ডেটা সংগ্রহ করার জন্য।MS প্যারামিটারগুলি নিম্নরূপ সেট করা হয়েছিল: স্প্রে ভোল্টেজ +3.8 kV/- 3.2 kV, কৈশিক তাপমাত্রা 320°C, শিল্ডিং গ্যাস 40 arb, সহায়ক গ্যাস 10 arb, প্রোব হিটার তাপমাত্রা 350°C, স্ক্যানিং পরিসীমা 70-1050 m/h, রেজোলিউশন70 000। এক্সক্যালিবুর 4.1 (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে ডেটা অর্জিত হয়েছিল।
ডেটা গুণমান মূল্যায়ন করতে, প্রতিটি নমুনা থেকে সুপারনাট্যান্টের 10 μL অ্যালিকোটগুলি সরিয়ে পুলড কোয়ালিটি কন্ট্রোল (QC) নমুনা তৈরি করা হয়েছিল।UPLC-MS সিস্টেমের স্থায়িত্ব মূল্যায়ন করার জন্য বিশ্লেষণাত্মক ক্রম শুরুতে ছয়টি মান নিয়ন্ত্রণের নমুনা ইনজেকশন বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।মান নিয়ন্ত্রণের নমুনাগুলি পর্যায়ক্রমে ব্যাচে প্রবর্তিত হয়।এই গবেষণায় সিরাম নমুনার সমস্ত 11 ব্যাচ এলসি-এমএস দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।নিষ্কাশন প্রক্রিয়া নিরীক্ষণ এবং ব্যাচ-টু-ব্যাচ প্রভাবগুলির জন্য সামঞ্জস্য করতে 100 সুস্থ দাতাদের থেকে একটি সিরাম পুলের মিশ্রণের অ্যালিকোটগুলি সংশ্লিষ্ট ব্যাচে রেফারেন্স উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।সান ইয়াত-সেন ইউনিভার্সিটির মেটাবোলোমিক্স সেন্টারে আবিষ্কারের দল, অভ্যন্তরীণ বৈধতা দল এবং বাহ্যিক বৈধতা গোষ্ঠীর লক্ষ্যহীন বিপাকবিদ্যা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।গুয়াংডং ইউনিভার্সিটি অফ টেকনোলজি অ্যানালাইসিস অ্যান্ড টেস্টিং সেন্টারের বাহ্যিক পরীক্ষাগারটি ক্লাসিফায়ার মডেলের কার্যকারিতা পরীক্ষা করার জন্য বহিরাগত দল থেকে 40 টি নমুনা বিশ্লেষণ করেছে।
নিষ্কাশন এবং পুনর্গঠনের পরে, মাল্টিপল রিঅ্যাকশন মনিটরিং (MRM) মোডে ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ESI) উত্স সহ অতি-উচ্চ কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি (এজিলেন্ট 6495 ট্রিপল কোয়াড্রপোল) ব্যবহার করে সিরাম মেটাবোলাইটের পরম পরিমাণ পরিমাপ করা হয়েছিল।একটি ACQUITY BEH Amide কলাম (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, Waters) বিপাক পৃথক করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।মোবাইল ফেজটিতে 90% (A) এবং 5% অ্যাসিটোনিট্রিল (B) 10 mmol/L অ্যামোনিয়াম অ্যাসিটেট এবং 0.1% অ্যামোনিয়া দ্রবণ রয়েছে।গ্রেডিয়েন্ট প্রোগ্রামটি নিম্নরূপ ছিল: 0-1.5 মিনিট, 0% বি;1.5-6.5 মিনিট, 0-15% B;6.5–8 মিনিট, 15% বি;8–8.5 মিনিট, 15%–0% B;8.5–11.5 মিনিট, 0% বি।কলামটি 40 ডিগ্রি সেলসিয়াসে এবং নমুনাটি অটোস্যাম্পলারে 10 ডিগ্রি সেলসিয়াসে বজায় রাখা হয়েছিল।প্রবাহের হার ছিল 0.3 মিলি/মিনিট এবং ইনজেকশনের পরিমাণ ছিল 1 μL।এমএস প্যারামিটারগুলি নিম্নরূপ সেট করা হয়েছিল: কৈশিক ভোল্টেজ ±3.5 কেভি, নেবুলাইজার চাপ 35 পিএসআই, শিথ গ্যাসের প্রবাহ 12 লি/মিনিট, শিথ গ্যাসের তাপমাত্রা 350 ডিগ্রি সেলসিয়াস, শুকানোর গ্যাসের তাপমাত্রা 250 ডিগ্রি সেলসিয়াস এবং শুকানোর গ্যাসের প্রবাহ 14 লি/মিনিট।Tryptophan, pyruvate, lactate, hypoxanthine এবং xanthine-এর MRM রূপান্তরগুলি ছিল 205.0–187.9, 87.0–43.4, 89.0–43.3, 135.0–92.3 এবং 151.0–107৷যথাক্রমে 9.Mass Hunter B.07.00 (Agilent Technologies) ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ করা হয়েছিল।সিরাম নমুনার জন্য, ট্রিপটোফান, পাইরুভেট, ল্যাকটেট, হাইপোক্সানথাইন এবং জ্যান্থাইন মানক মিশ্রণ সমাধানের ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।কোষের নমুনার জন্য, ট্রিপটোফ্যান সামগ্রীকে অভ্যন্তরীণ মান এবং কোষের প্রোটিন ভরে স্বাভাবিক করা হয়েছিল।
কম্পাউন্ড ডিসকভারি 3.1 এবং ট্রেসফাইন্ডার 4.0 (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে পিক নিষ্কাশন (m/z এবং ধরে রাখার সময় (RT)) সঞ্চালিত হয়েছিল।ব্যাচগুলির মধ্যে সম্ভাব্য পার্থক্য দূর করতে, পরীক্ষার নমুনার প্রতিটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত শিখরকে আপেক্ষিক প্রাচুর্য প্রাপ্ত করার জন্য একই ব্যাচ থেকে রেফারেন্স উপাদানের বৈশিষ্ট্যগত শিখর দ্বারা ভাগ করা হয়েছিল।প্রমিতকরণের আগে এবং পরে অভ্যন্তরীণ মানগুলির আপেক্ষিক মান বিচ্যুতিগুলি পরিপূরক সারণী 6 এ দেখানো হয়েছে। দুটি গ্রুপের মধ্যে পার্থক্যগুলি মিথ্যা আবিষ্কারের হার (FDR<0.05, উইলকক্সন স্বাক্ষরিত র্যাঙ্ক পরীক্ষা) এবং ভাঁজ পরিবর্তন (>1.2 বা <0.83) দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল।নিষ্কাশিত বৈশিষ্ট্যগুলির কাঁচা এমএস ডেটা এবং রেফারেন্স সিরাম-সংশোধিত এমএস ডেটা যথাক্রমে পরিপূরক ডেটা 1 এবং পরিপূরক ডেটা 2 এ দেখানো হয়েছে।পিক টীকাটি সনাক্তকরণের চারটি সংজ্ঞায়িত স্তরের উপর ভিত্তি করে সঞ্চালিত হয়েছিল, যার মধ্যে চিহ্নিত বিপাক, পুউটেটিভভাবে টীকাযুক্ত যৌগ, পুউটেটিভলি বৈশিষ্ট্যযুক্ত যৌগিক শ্রেণী এবং অজানা যৌগ 22 রয়েছে।কম্পাউন্ড ডিসকভারি 3.1 (mzCloud, HMDB, Chemspider) এ ডাটাবেস অনুসন্ধানের উপর ভিত্তি করে, MS/MS মিলে বৈধ মান সহ জৈবিক যৌগ বা mzCloud (স্কোর > 85) বা Chemspider-এ সঠিক ম্যাচ টীকাগুলি ডিফারেনশিয়াল মেটাবোলোমের মধ্যে মধ্যবর্তী হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল।প্রতিটি বৈশিষ্ট্যের জন্য পিক টীকাগুলি পরিপূরক ডেটা 3-তে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছে। মেটাবো অ্যানালিস্ট 5.0 যোগ-স্বাভাবিক বিপাক প্রাচুর্যের একক বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।MetaboAnalyst 5.0 এছাড়াও উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন বিপাকের উপর ভিত্তি করে KEGG পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণের মূল্যায়ন করেছে।প্রধান উপাদান বিশ্লেষণ (PCA) এবং আংশিক সর্বনিম্ন স্কোয়ার বৈষম্য বিশ্লেষণ (PLS-DA) স্ট্যাক স্বাভাবিককরণ এবং অটোস্কেলিং সহ ropls সফ্টওয়্যার প্যাকেজ (v.1.26.4) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।নোডুল ম্যালিগন্যান্সি ভবিষ্যদ্বাণী করার জন্য সর্বোত্তম মেটাবোলাইট বায়োমার্কার মডেলটি বাইনারি লজিস্টিক রিগ্রেশন ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল যাতে ন্যূনতম পরম সংকোচন এবং নির্বাচন অপারেটর (LASSO, R প্যাকেজ v.4.1-3)।সনাক্তকরণ এবং বৈধতা সেটে বৈষম্যমূলক মডেলের কর্মক্ষমতা পিআরওসি প্যাকেজ (v.1.18.0.) অনুযায়ী ROC বিশ্লেষণের উপর ভিত্তি করে AUC অনুমান করার দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল।সর্বোত্তম সম্ভাব্যতা কাটঅফ মডেলের সর্বাধিক ইউডেন সূচকের উপর ভিত্তি করে প্রাপ্ত হয়েছিল (সংবেদনশীলতা + নির্দিষ্টতা - 1)।থ্রেশহোল্ডের চেয়ে কম বা বেশি মান সহ নমুনাগুলি যথাক্রমে সৌম্য নোডুলস এবং ফুসফুসের অ্যাডেনোকার্সিনোমা হিসাবে অনুমান করা হবে।
A549 কোষ (#CCL-185, আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন) 10% FBS ধারণকারী F-12K মিডিয়ামে জন্মানো হয়েছিল।ছোট হেয়ারপিন RNA (shRNA) সিকোয়েন্সগুলিকে লক্ষ্য করে SLC7A5 এবং একটি ননটার্গেটিং কন্ট্রোল (NC) লেন্টিভাইরাল ভেক্টর pLKO.1-পুরোতে ঢোকানো হয়েছিল।shSLC7A5 এর অ্যান্টিসেন্স ক্রমগুলি নিম্নরূপ: Sh1 (5′-GGAGAAAACCTGATGAACAGTT-3′), Sh2 (5′-GCCGTGGACTTCGGGAACTAT-3′)।SLC7A5 (#5347) এবং টিউবুলিন (#2148) এর অ্যান্টিবডি সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি থেকে কেনা হয়েছিল।ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণের জন্য SLC7A5 এবং টিউবিউলিনের অ্যান্টিবডিগুলি 1:1000 এর পাতলা করে ব্যবহার করা হয়েছিল।
Seahorse XF গ্লাইকোলাইটিক স্ট্রেস টেস্ট এক্সট্রা সেলুলার অ্যাসিডিফিকেশন (ECAR) মাত্রা পরিমাপ করে।পরীক্ষায়, ECAR দ্বারা পরিমাপ করা সেলুলার গ্লাইকোলাইটিক ক্ষমতা পরীক্ষা করার জন্য ক্রমানুসারে গ্লুকোজ, অলিগোমাইসিন এ এবং 2-ডিজি পরিচালিত হয়েছিল।
নন-টার্গেটিং কন্ট্রোল (NC) এবং shSLC7A5 (Sh1, Sh2) দিয়ে স্থানান্তরিত A549 কোষগুলি রাতারাতি 10 সেন্টিমিটার ব্যাসের থালায় প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল।সেল মেটাবোলাইটগুলি 1 মিলি বরফ-ঠান্ডা 80% জলীয় মিথানল দিয়ে বের করা হয়েছিল।মিথানল দ্রবণে কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করা হয়েছিল, একটি নতুন টিউবে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং 4°C তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য 15,000 × গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল।800 μl সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করুন এবং একটি উচ্চ-গতির ভ্যাকুয়াম কনসেনট্রেটর ব্যবহার করে শুকিয়ে নিন।শুকনো মেটাবোলাইট পেলেটগুলি উপরে বর্ণিত হিসাবে এলসি-এমএস/এমএস ব্যবহার করে ট্রিপটোফান স্তরের জন্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।A549 কোষে (NC এবং shSLC7A5) সেলুলার NAD(H) স্তরগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে একটি পরিমাণগত NAD+/NADH কালারমিট্রিক কিট (#K337, বায়োভিশন) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।বিপাকের পরিমাণ স্বাভাবিক করার জন্য প্রতিটি নমুনার জন্য প্রোটিনের মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল।
প্রাথমিকভাবে নমুনার আকার নির্ধারণের জন্য কোন পরিসংখ্যানগত পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়নি।বায়োমার্কার আবিষ্কারের লক্ষ্যে পূর্ববর্তী বিপাকবিদ্যা গবেষণা 15,18 আকার নির্ধারণের জন্য মানদণ্ড হিসাবে বিবেচিত হয়েছে এবং এই প্রতিবেদনগুলির তুলনায়, আমাদের নমুনা পর্যাপ্ত ছিল।স্টাডি কোহর্ট থেকে কোনও নমুনা বাদ দেওয়া হয়নি।সিরাম নমুনাগুলি এলোমেলোভাবে একটি আবিষ্কার গ্রুপে (306 কেস, 74.6%) এবং একটি অভ্যন্তরীণ বৈধতা গোষ্ঠী (104 কেস, 25.4%) লক্ষ্যবিহীন বিপাকবিদ্যা অধ্যয়নের জন্য বরাদ্দ করা হয়েছিল।আমরা লক্ষ্যযুক্ত বিপাকবিদ্যা অধ্যয়নের জন্য আবিষ্কার সেট থেকে প্রতিটি গ্রুপ থেকে এলোমেলোভাবে 70 টি কেস নির্বাচন করেছি।এলসি-এমএস ডেটা সংগ্রহ এবং বিশ্লেষণের সময় তদন্তকারীরা গ্রুপ অ্যাসাইনমেন্টে অন্ধ হয়ে গিয়েছিল।মেটাবোলোমিক্স ডেটা এবং কোষ পরীক্ষার পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণগুলি সংশ্লিষ্ট ফলাফল, চিত্র কিংবদন্তি এবং পদ্ধতি বিভাগে বর্ণনা করা হয়েছে।সেলুলার ট্রিপটোফান, এনএডিটি, এবং গ্লাইকোলাইটিক কার্যকলাপের পরিমাণ নির্ণয় একই ফলাফলের সাথে তিনবার স্বাধীনভাবে সঞ্চালিত হয়েছিল।
অধ্যয়নের নকশা সম্পর্কে আরও তথ্যের জন্য, এই নিবন্ধের সাথে যুক্ত প্রাকৃতিক পোর্টফোলিও রিপোর্ট বিমূর্ত দেখুন।
নিষ্কাশিত বৈশিষ্ট্যগুলির কাঁচা MS ডেটা এবং রেফারেন্স সিরামের স্বাভাবিক MS ডেটা যথাক্রমে পরিপূরক ডেটা 1 এবং পরিপূরক ডেটা 2 এ দেখানো হয়েছে।ডিফারেনশিয়াল বৈশিষ্ট্যগুলির জন্য শীর্ষ টীকাগুলি পরিপূরক ডেটা 3-এ উপস্থাপন করা হয়েছে। LUAD TCGA ডেটাসেটটি https://portal.gdc.cancer.gov/ থেকে ডাউনলোড করা যেতে পারে।গ্রাফ প্লট করার জন্য ইনপুট ডেটা উৎস ডেটাতে দেওয়া হয়।উৎস তথ্য এই নিবন্ধের জন্য প্রদান করা হয়.
ন্যাশনাল লাং স্ক্রীনিং স্টাডি গ্রুপ, ইত্যাদি কম ডোজ গণনা করা টমোগ্রাফির মাধ্যমে ফুসফুসের ক্যান্সারের মৃত্যুহার কমানো।উত্তর ইংল্যান্ড।জে মেড.365, 395–409 (2011)।
Kramer, BS, Berg, KD, Aberle, DR এবং Prophet, PC ফুসফুসের ক্যান্সার স্ক্রীনিং কম-ডোজ হেলিকাল সিটি ব্যবহার করে: ন্যাশনাল লাং স্ক্রীনিং স্টাডি (NLST) থেকে ফলাফল।জে মেড.স্ক্রিন 18, 109–111 (2011)।
De Koning, HJ, et al.একটি এলোমেলো পরীক্ষায় ভলিউমেট্রিক সিটি স্ক্রিনিংয়ের মাধ্যমে ফুসফুসের ক্যান্সারের মৃত্যুহার হ্রাস করা।উত্তর ইংল্যান্ড।জে মেড.382, 503–513 (2020)।